在结尾时知道了。梅姨在搬家时也知道了，只是不说出来怕影响彼得。

梅姨为啥知道？注意一个细节，梅姨和彼得去银行办手续，正好八爪鱼搏士打劫银行，彼得变蜘蛛侠与他搏斗，八爪鱼掳走梅姨做人质，蜘蛛侠把梅姨救回来，临走前说“我们把他打败了”，梅姨问“你说的‘我们’是指什么意思？”。蜘蛛侠没回答，溜了。这个细节加上梅姨搬家时跟彼得说的那番鼓励的话，可以断定，梅姨知道彼得是蜘蛛侠。